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组织分离法 组织分离法是通过切取菌索、子实体、菌核的新鲜幼嫩的组织进行分离,以获取纯菌丝的方法,是常用的菌种分离法之一 。子实体、菌索等实际就是双核菌丝的纽结物,具有很强的再生能力。因分离时所 选择的材料不同 ,该方法又可分为菌索组织分离法、子实体组织分离法及菌核组织分离法。在实践中,子实体组 织分离法是有效、常用的方法。但对于胶质菌,由于其子实体中所含的菌丝量比较低 ,如黑木耳、银耳等,利用组织分离培养难度较大。组织分离属于无性繁殖的范畴,能保持原菌株的特性,遗传稳定变异小,不仅适于孢子不易收集或萌发的食用菌,也适于稳定优良品种的遗传性。
孢子分离法 孢子分离法,是采取子囊果或子实体中成熟的子囊孢子或有性孢子萌发成纯菌丝,再进一步培养成菌种的方法。由此法可以获得强活性、短菌龄的菌丝,该方法的另外一个优点是分离得到的有性孢子兼有双亲的遗传特性,可用于杂交育种和选育新种中。只是孢子间不仅存在个体差异,还存在较普遍的自然分化现象,出现的变异较大,必须经过出菇试验后才能用于生产中团。对于产孢子的真菌,一般其分离法多采用孢子分离法。
种菇选择与处理 在选择种菇时,选取个体典型、大小适中均匀、健壮无杂且成熟度8成的子实体。将选好的种菇的杂物去除,并切除菇柄。用75%酒精抹擦菇体,或用0。1%升汞浸泡1min(银耳、木耳类胶质菌的子实体只能用无菌水多次冲洗)。然后用无菌水冲洗种菇表面的残留药液。用无菌纱布拭干表面水分,并放入灭菌的器皿内备用。
孢子采集 根据采集孢子的方法不同,又可分为以下几种。在用弹射法时,先安装已灭菌的孢子采集器,将经过处理的种菇菌褶朝下固定于三角架(采集器上)之上,扣上罩子,接着用0。1%升汞溶液润湿纱布并铺在培养皿的四周,既能防杂菌污染,又能增加罩内的湿度。再将整个采集器用灭菌的纱布覆盖,在适温漫射光条件下培养12~20h,待孢子散出,选择在无菌的条件下将落有孢子的培养皿进行培养。钩悬法是银耳、木耳等无菌柄类食用菌生产上常用的孢子采集法。取一金属针两头做成钩状,经火焰灼烧后一端固定于锥形瓶上,另一端钩住食用菌的子实体,塞上棉塞,于无菌环境中室温搁置约2d,见瓶底有落下的孢子,即除去悬钩和子实体备用。孢子收集的方法有很多,除了上述方法外,还有贴附法、印模法等。
孢子分离 孢子分离有2种,分别为多孢分离和单孢分离,都是先收集孢子再经过分离选择,终制成可供生产使用的菌种。其中多孢分离在生产使用较为普遍,如银耳、香菇、黑木耳等异宗结合的食用菌。它们的孢子有性别之分,单个孢子生产的菌丝无法结菇,因此需要把多个孢子接种在同一培养基上,发菌丝后自然交配,经挑选得到纯种,该操作简单易行。而蘑菇、草菇等孢子无性别区分,结实能力较强,单个孢子萌发即获得纯菌种。但生产上使用的食用菌同宗结合的种类相对较少,因此单孢分离多用于育种,生产上很少采用。
基内菌丝分离法 从食用菌生长基质中分离选择获得纯菌种的方法叫基内菌丝分离法。如可利用菇木、耳木、菌棒及土壤等作为分离材料进行分离。此法操作较复杂,但适宜不易采得子实体、错过子实体发生时期的菌类或胶质菌的菌种分离。使用此法时要特别注意,干燥耳木或菇木中的菌丝多处在休眠期。接种后有时需恢复25~30d才能断定菌丝是否能恢复活性。